JК
Инфекции, передаваемые половым путем :: Скрипкин Юрий Константинович
Страница: 391 из 516Несвязавшиеся с антигеном антитела удаляются при отмывке планшета.
Затем во все лунки планшета вносят конъюгат-антитела против иммуноглобулинов человека, меченные ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.). При последующей инкубации происходит образование комплекса антиген – антитело – конъюгат. Несвязавшийся конъюгат удаляется во время отмывки планшета. Наиболее широко применяемым индикаторным ферментом для ИФА служит пероксидаза хрена. Субстраюм для нее служит перекись водорода.
Эта реакция протекает без видимых проявлений. Изменение окраски раствора происходит при окислении красителей (ортофени-лендиамина или др.), которые входят в состав субстратного раствора. Краситель из восстановленной формы переходит в окисленную окрашенную форму. Таким образом происходит окрашивание только тех лунок, в которых присутствует комплекс антиген – антитело – конъюгат. Иногда окрашивание может быть результатом неспецифического связывания иммуноглобулинов с антигенами ВИЧ. Учет реакции проводят на спектрофотометре (ридере) при длине волны, указанной в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Длина волны зависит от красителя, используемого в тест-системе.
При постановке ИФА в случае получения положительного результата анализ проводится еще 2 раза (с той же сывороткой). При получении хотя бы еще одного положительного результата сыворотки направляют в референс-лабораторию.
Иммунный блоттинг.
Затем во все лунки планшета вносят конъюгат-антитела против иммуноглобулинов человека, меченные ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.). При последующей инкубации происходит образование комплекса антиген – антитело – конъюгат. Несвязавшийся конъюгат удаляется во время отмывки планшета. Наиболее широко применяемым индикаторным ферментом для ИФА служит пероксидаза хрена. Субстраюм для нее служит перекись водорода.
Эта реакция протекает без видимых проявлений. Изменение окраски раствора происходит при окислении красителей (ортофени-лендиамина или др.), которые входят в состав субстратного раствора. Краситель из восстановленной формы переходит в окисленную окрашенную форму. Таким образом происходит окрашивание только тех лунок, в которых присутствует комплекс антиген – антитело – конъюгат. Иногда окрашивание может быть результатом неспецифического связывания иммуноглобулинов с антигенами ВИЧ. Учет реакции проводят на спектрофотометре (ридере) при длине волны, указанной в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Длина волны зависит от красителя, используемого в тест-системе.
При постановке ИФА в случае получения положительного результата анализ проводится еще 2 раза (с той же сывороткой). При получении хотя бы еще одного положительного результата сыворотки направляют в референс-лабораторию.
Иммунный блоттинг.